tai

Komórki CHO

Są to komórki unieśmiertelnione, rosnące w monowarstwie. Do produkcji przeciwciał na dużą skalę. Jeśli są stosowane jako terapeutyki muszą mieć odpowiednią glikozylację i nieuszkodzony fragment CDR.

IgM

Przeciwciało o strukturze pentameru, które jest odpowiedzią pierwotną na antygen. Duze, nie ma umiejętności do podróży międzytkankowej, produkowane przez limfocyty B. Później zastępywane przez IgG

IgA

Zapewniają miejscową odporność. Zazwyczaj o postaci dimeru. Występuje w płynach ustrojonych tj. limfa, ślina, krew, łzy.

IgD

Najmniej poznane. Znajdują się na powierzchni komórek dziewiczych (nieaktywowanych limfocytach B)

IgE

Najmniejsze ze wszystkich. Wiążą się z alergenami, indukują wydzielanie histaminy, Uruchamiają reakcje przeciwpasożytnicze.

IgG

Występują w odpowiedzi wtórnej, jest ich najwięcej we krwi. Chronią przed patogenami.

Przeciwciała monoklonalne

Wiążą jeden epitop, wysoka cena, wiarygodne wyniki, długotrwały proces produkcji, powtarzalne badania, powtarzalność serii produkcyjnej, małe tło w technikach immunologicznych.

Uzyskanie przeciwciał monoklonalnych (jakie dwie technologie?)

1. Technologia hybrydomy. 2. Technologia rekombinowanych przeciwciał.

Heterogenność przeciwciał

I. Izotypia.II. Allotypia. III. Idiotypia.

I. Izotypia

Zmienność w domenach C. Określa przynależność do danego gatunku.

II. Allotypia

Zmienność w obrębia jednego gatunku. Zmienność w obrębie C, przede wszystkim HC.

I. Idiotypia

Zmienność w obrębie CDR. Przeciwciała idiotypote to przeciwciała tej samej klasy, ale o różnej swoistości (skierowane przeciw różnym determinantom)

Przeciwciała chimeryczne

Przeciwciało, którego część zmienna pochodzi od myszy a część stała jest ludzka

Przeciwciało humanizowane

Przeciwciało, którego część nadzmienna pochodzi od myszy a część stała jest ludzka

Wydobycie przeciwciała z podłoża

1. Pozbycie się lipidów. 2. Usunięcie białek poprzez wysalanie np. siarczanem amonu do wysycenia 50% i wytrącenie białek kwasem kaprylowym. 3. Zastosowanie technik chromatograficznych.

Zalety linii CHO

Łatwa do manipulacji genetycznej, zdolna do odpowiedniej modyfikacji potranslacyjnej, szybki wzrost w postaci zawiesinowej, bezpieczna do wytwarzania farmaceutyków.

Cechy idealnego antygenu

Oddalony genetycznie, Zróżnicowany - z łańcuchami bocznymi bądź pierścieniami aromatycznymi, duża, kolista cząsteczka, nierozpuszczalny w wodzie, wprowadzona doustnie bądź w zastrzyku, wyważona dawka (nie za mała, nie za duża)

Kompleks immunologiczny

Antygen złączony z przeciwciałem

Miano

Określa największe możliwe rozcieńczenie, przy którym jest możliwe rozpoznanie odpowiedniego antygenu

Technologia hybrydomy

1. Immunizacja - wprowadzenie antygenu do organizmu producenta. 2. Fuzja - połączenie prawidłowych komórek z unieśmiertelnionymi limfocytami. 3. Klonowanie. 4. Namnażanie klonów. 5. Otrzymanie przeciwciał monoklonalnych

Hybrydoma

Komórka będąca wynikiem fuzji komórkowej, wykazująca cechy obu komórek macierzystych

Przeciwciała poliklonalne

Rozpoznają wiele epitopów, prod. przez kilka klonów limfocytów B, szybsze, tańsze w prod., NIE jako terapeutyki, większy sygnał tła w tech. immuno, zalecane gdy AG nieznany, dają reakcje krzyżowe, niepowtarzalność serii prod., duża siła wiązania.

Rola adjuwantu

Wydłuża działania antygenu, zwiększa miejscowy stan zapalny, wzmacnia sygnał stymulujący odpowiedź immunologiczną, niespecyficznie wzmacnia proliferację limfocytów.

Booster

Dawka przypominająca

Parametry charateryzujące przeciwciało

1. Wartościowość, 2. Powinowactwo, 3. Zachłanność.

Wartościowość

Określa ile epitopów może związać przeciwciało

Powinowactwo

Siła wiązania antygenu z przeciwciałem

Zachłanność

Sumaryczna liczba oddziaływań między epitopem a paratopem

Przeciwciała

Specyficzne białka wydzielane przez aktywowane limfocyty B

Białka nośnikowe

Białko wiążące z haptenem dla zaindukowania odpowiedzi immuno. i wytworzenia przeciwciał. Najczęściej stosowanymi są hemocyjanina skałoczepa KLH oraz albumina surowicy bydlęcej, owoalbumina.

Typy epitopów

Konformacyjny (przestrzenny), sekwencyjny (liniowy), nakładający się

Biblioteki fagowe

Nadają się do badania związków toksycznych, bo fagi nie reagują z toksynami, łatwy dostęp do odkrytych sekwencji, fagi namnażanie w E. coli, dostęp do przeciwciał ludzkich i innych gatunków.

Typy immunodetekcji

I. bezpośrednia (na poziom insuliny). II. Pośrednia. III. Technika kanapkowa.IV. Test pośredni z biotyną.

Test na poziom insuliny

Pobiera się krew, izoluje surowicę, nanosi na dołki płytki, białka z surowicy się zaadsorbują do podłoża, reszta jest zlewana, na koniec wprowadza się przeciwciała, przemywa i wprowadza jako substrat dla enzymu.

Splenocyty

Limfocyty występujące w śledzionie mogące przekształcić się w każdą białą krwinkę.